什么是植物细胞组织培养？

植物细胞组织培养

1.实验的目的？

植物细胞和组织培养是高度技术性的，需要无菌操作。通过本实验，掌握常规组织培养技术，加深对无菌操作的理解。？

2.实验原理？

植物的全能性:植物中的任何一个细胞都具有生长和分化为一个完整植株的能力，称为植物全能性。？

植物组织培养是利用植物全能性在体外培养不育植物的技术。植物组织培养按其本义是指愈伤组织培养。但时至今日，其范围日益扩大，包括植物及其离体器官、组织、细胞和原生质体的无菌培养。因此，有几种不同层次的培养技术，即整体、器官、组织、细胞和原生质培养技术。他们的意思是:

1.植物文化。指以完整的植物形态材料(如幼苗和较大的植株)为外植体的无菌培养。

2.？胚胎培养。以从胚珠上分离的成熟或未成熟胚为外植体进行体外无菌培养。

3.？器官文化。是指以根、茎、叶、花、果实等器官为外植体的离体无菌培养，如根尖和切段、茎尖、茎节和切段、叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶、花器官的花瓣、雄蕊(花药、花丝)、胚珠、子房、果实等离体无菌培养。

4.组织培养。无菌体外培养是指从植物的各个部位(如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓等)分离出的组织。)或诱导的愈伤组织作为外植体。这是狭义的组织培养。

5.细胞培养。指以单个游离细胞(如通过尿酸酶从组织中分离出来的体细胞、花粉细胞和卵细胞)为接种物的分离无菌培养物。

6.原生质体培养。体外无菌培养，其中去除细胞壁的原生质体用作外植体。

本试验以烟草和豌豆为材料。烟草是一种重要的工业原料，也是植物组织培养中四种典型的实验植物(烟草、矮牵牛、胡萝卜和芸苔)之一。它的研究是最广泛的，总是领先于其他植物材料。目前，在66个烟草品种中，有16有再生植株。通过花药培养再生花粉植株的有12种，通过原生质体培养再生植株的有20种，通过烟草种内和种间原生质体融合再生杂种的有3种和12种。豌豆(Pisum？Sativum)是豆科植物，是重要的粮食、饲料和蔬菜作物。也是遗传学家和植物生理学家感兴趣并愿意采用的实验植物。豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花蕾等外植体都能形成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、幼叶等器官都能成功再生植株。茎尖培养可包括小至十微米的茎尖分生组织(生长点)和大至几十毫米或更大的茎尖培养。实践中，常对无病毒病株采用生长点培养，以保存优良品种，提高产量和质量。

3.实验材料？

仪器设备？

1.酒精灯，100ml三角烧瓶，9 cm培养皿；

2.镊子、剪刀和解剖针；

3.双筒解剖显微镜；

4.光照培养箱或温室；

材料和试剂？

1.材质？烟草无菌苗、豌豆苗。

2.试剂

(1)MS培养基，植物激素:NAA、6-BA等。

(2)饱和漂白粉溶液(次氯酸钠)；

(3)70%酒精、100%酒精和酒精棉球；

(4)无菌水？

4.实验步骤？

1.烟草无菌苗的快速扦插繁殖——继代培养:(要求完全无菌操作)？

每组一瓶烟草无菌苗，请小心操作，以免污染。？

(1)?在实验台上，点亮酒精灯，用酒精棉球擦手消毒，打开装有无菌烟苗的三角瓶。三角瓶的瓶口在使用前后都需要在酒精灯的外焰上灼烧消毒。？

(2)?用消毒镊子轻轻挤出1苗，用消毒剪刀将无菌苗剪成0.5-1 cm的小块，要求每块至少含有一个生长点，直接剪成装有MS培养基的三角瓶。每片必须直接接触培养基，三角瓶口必须重新消毒，重新封口。？

(3)?在65438±05 ~ 25℃、65438±06小时的光照培养箱中培养4周，即可长出完整植株，可用于大田移栽。？

2.豌豆苗茎尖培养？

⑴?取发芽6天的65，438+00豌豆苗，简单取65，438+0 cm茎尖，用70%酒精浸泡65，438+0分钟，再用饱和次氯酸钠溶液浸泡消毒65，438+05分钟，用无菌水冲洗5次(此步后要求无菌)，用灭菌滤纸吸水，放入灭菌培养皿中。？

⑵?在双目解剖镜下，用已消毒的解剖针剥离幼叶，露出生长锥，用已消毒的解剖针挑取具有两个或三个叶原基的生长锥。？

⑶?将采摘的茎尖移至MS+10.7 μm ol/L NAA+4.4 μm ol/L？在6-苄基腺嘌呤(6-BA)培养基上诱导愈伤组织形成，并用密封膜密封培养皿。？

【4】在26℃恒温培养箱中培养六周形成愈伤组织，继代培养后可用于生根培养。