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红豆杉细胞系合成紫杉醇能力低,传代不稳定是限制其大规模培养的主要原因。到目前为止,红豆杉细胞培养生产紫杉醇已达到中试水平,但要实现大规模生产,关键是提高培养产量和紫杉醇含量,选择高产细胞系。因此,建立稳定的高产细胞系及其稳定的保存技术是工业化生产的前提。

红豆杉无性系整合紫杉醇能力差,不能稳定传代是限制其大规模栽培的主要原因。到目前为止,红豆杉无性系培养生产紫杉醇已达到中试水平,但要实现规模化生产,关键是通过选择高产无性系来提高培养物和紫杉醇的产量。因此,工业化生产的前提是建立稳定的高产细胞株和稳定的储存技术。

本研究的目的是通过添加前体和紫外线诱变来筛选产紫杉醇的细胞系。主要结果如下:

本研究的目的是通过增加前体筛选,从紫外诱变中筛选出高产紫杉醇的细胞株。获得的主要结果如下:

(1)红豆杉细胞对前体苯丙氨酸的耐受性较高,作用缓慢且持续时间较长。当苯丙氨酸浓度达到4.0mmol/L时,继代培养不再生长。因此,最佳筛选浓度为3.0 mmol/L

(1)红豆杉细胞对前体苯丙氨酸具有相对高水平的耐受性,并且受到的影响相当缓慢且持续时间长。苯丙氨酸浓度达到4.0 mmol/l时,继代培养无法生长,因此过滤最适宜的浓度为3.0mmol/L

(2)红豆杉细胞对前体苯甲酸钠的耐受性低,作用迅速且持续时间短。苯甲酸钠浓度为0.5mmol/L时,细胞生长良好,但促进作用不明显。当苯甲酸钠浓度为1.5mmol/L时,细胞不能生长。当苯甲酸钠浓度为1.0mmol/L时,继代培养不能再生长,当苯甲酸钠浓度为0.5mmol/L时,继代培养能再生长,因此最佳筛选浓度为0.5 mmol/L左右。

(2)红豆杉细胞对前体苯甲酸盐的耐受性相对较低,且受影响的速度较快,持续时间较短。苯甲酸盐浓度为0.5mmol/L时,细胞生长良好,但促进作用不明显。当苯甲酸盐浓度达到1.5mmol/ L时,细胞停止生长,当苯甲酸盐浓度达到1.5mmol/L时,继代培养不能生长,而在0.5mmol/ L时生长,因此,过滤的理想浓度为0.5mmol/L左右

(3)紫外诱变结合前体物筛选红豆杉高产细胞系是可行的。当苯甲酸钠为0 mmol/L时,红豆杉细胞开始生长。但一定程度上是随机的,所以不确定。

紫外诱变与前体筛选相结合有可能获得高产红豆杉细胞株,因为当苯甲酸浓度为0mmol/L时,有新的红豆杉细胞生长;但是由于随机性,还没有得到证实。