一步增长曲线的不同阶段
一步生长曲线分为孕育期、裂解期和稳定期。
一步增长曲线的不同阶段
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潜伏期
指从噬菌体核酸侵入宿主细胞到装配第一个成熟噬菌体颗粒的时间。可分为两个阶段:1,隐晦阶段:指宿主细胞被人工裂解(用氯仿等)后的一段时间。)在孵化期早期,此时细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段;2.细胞内聚集期:即潜伏期的后期,这意味着在隐晦期之后,如果人工裂解细胞,裂解物已经有一段时间的感染性,这意味着噬菌体颗粒已经在细胞内组装,这可以通过电镜观察到。
开裂期
孵育期后,宿主细胞迅速裂解,溶液中的噬菌体颗粒迅速增加。噬菌体或其他病毒颗粒不能单独生长,因为它们只是由个体组装而成。此外,如果宿主细胞突然破裂,理论上,它们的破裂是瞬间发生的。但实际上,由于宿主群体中每个细胞的裂解不能同步进行,所以出现了较长的裂解期。
固定相
意味着所有被感染的宿主细胞已经被裂解,溶液中的噬菌体数量已经达到峰值。在此期间,每个宿主细胞释放的噬菌体颗粒的平均数就是裂解量。
实验法
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一步生长曲线的实验方法是:首先将对数生长期的敏感菌悬液与适量的噬菌体混合。通常,噬菌体和细菌的混合比例为1:10,以防止几个噬菌体同时感染一个细菌细胞。吸附几分钟后,向混合溶液中加入一定量的噬菌体抗血清,以中和未吸附的噬菌体。然后高倍稀释培养液,避免二次吸附和感染。培养后定期取样,将含噬菌体的样品与敏感菌混合,在平板上培养,计算空斑数。结果表明,在吸附后的最初一段时间(5 ~ 10 min)内,噬菌斑数量没有增加,说明噬菌体还没有完成复制和组装,这段时间称为噬菌体的潜伏期。在潜伏期(感染后20 ~ 30 min)后,平板中的噬菌斑数量突然线性上升,说明噬菌体已经从宿主细胞中释放出来,称为裂解期。每个感染细菌释放的新噬菌体的平均数量称为裂解量。当宿主完全裂解,溶液中噬菌体的滴度达到最高点时,称为静止期。
结论
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通过一步生长曲线,可以得到病毒的潜伏期和破解量。潜伏期是病毒颗粒吸附细胞和被感染细胞释放后代所需的最短时间。裂解量是每个感染细胞产生的平均子代病毒颗粒数,其值等于稳定期感染细胞释放的全部子代病毒数除以潜伏期感染细胞数,即等于稳定期病毒滴度与潜伏期病毒滴度之比。
单脉冲曲线
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定量描述强毒噬菌体生长规律的实验曲线。基本步骤是用稀释的噬菌体悬浮液感染高浓度的宿主细胞,以确保每个细胞吸附的噬菌体不超过一个。几分钟后,停止吸附,稀释并在细菌的最佳生长温度下培养。在一定时间内,每隔几分钟取样进行效价测定。以效价为纵坐标,培养时间为横坐标绘制的曲线为一步生长曲线,可以反映每种噬菌体最重要的三个特征参数:孵化期、裂解期和裂解量。